【摘要】 目的 建立用HPLC法测定异烟肼注射液含量的方法。方法 HPLC法，采用Hypersil BDS C18柱，以乙腈0.075 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（体积比5∶95）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长262 nm。结果 异烟肼在9.90～99.00 μg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率100.3%（RSD=1.0%）。结论 本法操作简便，快速准确，重复性好，可作为本品质量控制方法。
【关键词】 HPLC法；异烟肼注射液；异烟肼
　　Abstract:Objective To establish an HPLC method for determining the content of isoniazid in isoniazid injection.Method Samples were analyzed on an Hypersil BDS C18 column using acetonitrile0.075 mol·L-1 sodium dihydrogen phosphate (5∶95) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1 and the detection wavelength 262 nm.Results There was a good linearity for isoniazid in the range of 9.90-99.00 μg·mL-1 (r=0.9999). The average recovery was 100.3% with RSD 1.0%.Conclusion The method is simple， rapid and accurate， which is suitable for the quality control of isoniazid injection.
　　Key words: HPLC; isoniazid injection; isoniazid
　　异烟肼注射液为抗结核药，卫生部药品标准采用溴酸钾滴定法测定异烟肼含量［1］。本文参照文献［2］建立了HPLC法测定异烟肼注射液的含量，试验结果表明，本法操作简便，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。
　　1仪器与试药
　　1.1仪器Agilent 1100液相色谱仪（安捷伦公司），Hypersil BDS C18柱（菲罗门公司），TU1901型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），AG285电子天平（梅特勒-托利多公司）。
　　1.2试药异烟肼对照品（质量分数99.4%，批号T2006236，广州白云山明兴制药有限公司提供）。异烟肼注射液（批号061101，061102，061103；规格2 mL∶100 mg，广州白云山明兴制药有限公司生产）。乙腈（色谱纯，德国默克公司），磷酸二氢钠（分析纯），水（注射用水，广州白云山明兴制药有限公司自制）。
　　2方法与结果
　　2.1对照品溶液的制备取异烟肼对照品约100 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（0.990 0 mg·mL-1）；精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.039 60 mg·mL-1的对照品溶液。
　　2.2供试品溶液的制备精密量取异烟肼注射液2 mL（约相当于异烟肼100 mg），置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.3空白对照溶液的制备除异烟肼外，按处方采用“2.2”项下的方法制备空白对照溶液。
　　2.4色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Hypersil BDS C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈0.075 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（体积比5∶95），流速为1.0 mL·min-1，检测波长为262 nm，柱温为30 ℃，进样量为20 μL。分别将对照品溶液、供试品溶液与空白对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数以异烟肼峰计算应不低于6 000。空白对照溶液在异烟肼峰处无干扰。结果见图1。

转贴于 免费论文下载中心 　　图1对照品（A）、样品（B）及空白对照（C）高效液相色谱图（1.异烟肼）　略
　　2.5 线性关系考察分别精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL对照品贮备液，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依法测定，记录色谱图，以峰面积（A）为纵坐标、质量浓度(ρ)为横坐标计算得回归方程：A=32.697ρ-14.975，r=0.999 9。结果表明，异烟肼在9.90～99.00 μg·mL-1范围内线性关系良好。
　　2.6精密度试验取对照品溶液，连续重复进样5次，结果峰面积的RSD为0.04%，表明方法精密度良好。
　　2.7重复性试验取同一批号异烟肼注射液（061101）5份，依法测定，计算，结果异烟肼含量的RSD为0.4%，表明方法重复性较好。
　　2.8稳定性试验取供试品溶液于0、3、6、12、24、48 h分别依法测定，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.6％，表明供试品溶液在48 h内稳定。
　　2.9回收率试验精密量取已知含量为1.023 mg·mL-1的异烟肼注射液（批号061101）1.0 mL，置50 mL量瓶中，分别精密加入对照品贮备液（0.9900 mg·mL-1）0.8、1.0、1.2 mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，依法测定。结果见表1。
　　表1异烟肼回收率试验结果　略
　　2.10样品测定
　　
　　取本品，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法计算异烟肼含量。同时采用溴酸钾法测定含量。结果见表2。
　　表2样品测定结果　略
　　3讨 论
　　3.1测定波长的选择照紫外可见分光光度法，取对照品溶液在200～400 nm的波长范围内扫描，绘制吸收光谱图，测得异烟肼的最大吸收波长为262 nm；另取空白对照溶液在此范围内扫描，发现在异烟肼最大吸收峰处无干扰，故选择262 nm为检测波长。
　　3.2流动相的选择曾选用不同比例的甲醇0.075 mol·L-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.025 mol·L-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.075 mol·L-1磷酸二氢钠溶液为流动相进行试验，发现以乙腈0.075mol·L-1磷酸二氢钠溶液（体积比5∶95）为流动相的测定结果比较理想，故确定以此为流动相。
　　3.3本法与现有药品标准方法的比较经试验，本文方法与溴酸钾法［1］测定异烟肼注射液的含量结果无显著差异，且本法灵敏度高，专属性强，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。

参考文献

　　［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：化学药品及制剂第一册［D］.1989：41.

　　［2］ 杜兴.高效液相色谱法测定复方异烟肼片中各组分的含量［J］.中国药事，15（2）：116.